Transferència d'energia per ressonància de fluorescència (FRET)
La transferència d'energia per ressonància de fluorescència (FRET) és un procés de transferència d'energia no radiativa en què l'energia de l'estat excitat del donant es transfereix a l'estat excitat de l'acceptador mitjançant la interacció de parelles elèctriques intermoleculars.Aquest procés no implica fotons i, per tant, no és radiatiu.Aquest assaig té els avantatges de ser ràpid, sensible i senzill.
El colorant utilitzat en l'assaig FRET pot ser idèntic.Però en la majoria de les aplicacions, en realitat s'utilitzen diferents colorants.En resum, la transferència d'energia de ressonància lluminosa és la transferència d'un parell de dipols del donant (colorant 1) a l'acceptor (colorant 2) quan el grup donant està excitat.En general, l'espectre d'emissió del grup de fluoròfors donant se solapa amb l'espectre d'absorció del grup Acceptor."Quan la distància entre els dos fluoròfors és adequada (10 - 100 A), es pot observar la transferència d'energia del fluoròfor del donant a l'acceptor".El mètode de transferència d'energia depèn de l'estructura química del receptor:
1. Es converteix en vibració molecular, és a dir, la llum lluminosa de transferència d'energia desapareix.(El receptor és un extintor de llum)
2. L'emissió és més intensa que el propi receptor, donant lloc a un desplaçament cap al vermell en l'espectre de fluorescència secundari".(Els receptors són emissors lluminosos).
El grup donant (EDANS) i el gen acceptor (DABCYL) estan units uniformement al substrat natural de la proteasa del VIH, i quan el substrat no es desconnecta, DABCYL pot apagar EDANS i després esdevenir indetectable al fluor.Després de la desconnexió de la proteasa del VIH-1, EDANS ja no és extingit per DABCYL i posteriorment es poden detectar luciferases EDANS.La disponibilitat d'inhibidors de proteases es pot controlar mitjançant canvis en la intensitat de fluorescència d'EDANS.
Els pèptids FRET són eines convenients per estudiar la inespecificitat de la peptidasa.Com que el seu procés de reacció es pot controlar contínuament, proporciona un mètode convenient per detectar l'activitat enzimàtica.La brillantor produïda després de la hidròlisi dels enllaços peptídics pel donant/acceptador proporciona una mesura de l'activitat enzimàtica a concentracions nanomolars.Quan el pèptid FRET està intacte, mostra una desaparició sobtada del flaix intern, però quan qualsevol enllaç peptídic oposat al donant/acceptador es trenca, allibera un flaix, que es pot detectar contínuament i després es pot quantificar l'activitat enzimàtica.
Hora de publicació: 14-agost-2023