Fluoreszcencia rezonancia energiaátadás (FRET)
A fluoreszcencia rezonancia energiaátvitel (FRET) egy nem sugárzó energiaátadási folyamat, amelyben a donor gerjesztett állapotú energiát az intermolekuláris elektromos párok kölcsönhatása révén az elfogadó gerjesztett állapotába helyezik. Ez a folyamat nem foglalja magában a fotonokat, és ezért nem sugárzó. Ennek a vizsgálatnak az a előnye, hogy gyors, érzékeny és egyszerű.
A FRET -vizsgálatban használt festék azonos lehet. De a legtöbb alkalmazásban valójában különféle színezékeket használnak. Röviden: a fényes rezonancia energia átvitele egy pár dipol átadása a donorból (1. festék) az akceptorba (2. festék), amikor a donor csoport izgatott. Általánosságban elmondható, hogy a donor fluorofor csoport emissziós spektruma átfedésben van az akceptor csoport abszorpciós spektrumával. "Ha a két fluorofor közötti távolság megfelelő (10–100 A), akkor megfigyelhető a fluorofor energia átvitele a donorról az akceptorra." Az energiaátvitel módszere a receptor kémiai szerkezetétől függ:
Az 1. (A receptor egy könnyű oltó)
2. A kibocsátás intenzívebb, mint maga a receptor, ami vöröseltolódást eredményez a másodlagos fluoreszcencia spektrumban. ” (A receptorok világító kibocsátók).
A donorcsoport (Edans) és az akceptor gén (DABCYL) egyenletesen kapcsolódik a HIV -proteáz természetes szubsztrátjához, és amikor a szubsztrátot nem leválasztják, a dabcil quenle edans képes, majd a fluorok számára nem észlelhető. A HIV-1 proteáz leválasztásakor az edanokat a dabcil már nem oltja le, és az edans luciferázok később felismerhetők. A proteáz -gátlók rendelkezésre állását az edans fluoreszcencia intenzitásának változásaival figyelhetjük meg.
A FRET peptidek kényelmes eszközök a peptidáz nem specifikusságának vizsgálatához. Mivel a reakciófolyamat folyamatosan ellenőrizhető, kényelmes módszert kínál az enzimaktivitás kimutatására. A peptidkötések donor/akceptor általi hidrolízise után előállított fényesség az enzimaktivitást nanomoláris koncentrációkon adja meg. Amikor a FRET peptid ép, akkor a belső vaku hirtelen eltűnését mutatja, de ha a donor/akceptor megszakításával ellentétes peptidkötés, akkor egy flash -ot szabadít fel, amely folyamatosan kimutatható, és az enzim aktivitása ezután számszerűsíthető.
A postai idő: 2025-07-02