A rekombináns protein antigéneknek gyakran számos különféle epitópja van, amelyek közül néhány szekvencia -epitóp, mások szerkezeti epitópok. Az állatok denaturált antigénekkel történő immunizálásával nyert poliklonális antitestek az egyes epitópokra specifikus antitestek keverékei, és általában felhasználhatók a természetes struktúrák vagy denaturált célfehérjék kimutatására. A denaturált fehérjék immunogénekként történő felhasználásának mellékhatása az, hogy a denaturált fehérjék általában immunogenikusabbak és stimulálhatják az állatok erős immunválaszt.
Az Escherichia coli expressziós rendszerét általában antigén célokra választják, mivel ez az idő és a pénz szempontjából a legköltségesebb rendszer. A célfehérje expressziójának és a tisztítás kényelmének javításának javítása érdekében néha a célfehérje, például egy specifikus domén csak egy kis fragmentuma expresszálódik.
A fehérjék háromdimenziós szerkezete
A fehérje specifikus doménje
Ha az antitestkészítés célja kizárólag a WB kimutatására szolgál, akkor gazdaságos és gyors a szintetikus kis peptid antigénként történő felhasználása, de fennáll a gyenge immunogenitás vagy nem regenicitás kockázata a peptidszegmens nem megfelelő szelekciója miatt. Mivel az antitestkészítés hosszú időszakot igényel, gyakran két vagy három különböző peptidszegmenst választanak ki az antitestek előkészítésére a polipeptid antigén alkalmazásával a kísérlet sikerességi sebességének biztosítása érdekében.
A polipeptid antigén tisztasága az immunizáláshoz 80%-nál nagyobb. Noha a nagyobb tisztaság elméletileg jobb specifitású antitesteket kaphat, a gyakorlatban az állatok mindig nagyszámú nem-specifikus antitestet termelnek, ezáltal elfedve az antigén tisztaságának előnyeit.
Ezenkívül a kis peptidekből származó antitestek előállítását át kell kapcsolni a megfelelő hordozó antigénhez, hogy javítsa immunogenitását. Két általános antigén hordozó a KLH és a BSA.
A postai idő: 2025-07-03