Els antígens de proteïnes recombinants sovint tenen diversos epítops diferents, alguns dels quals són epítops de seqüència i alguns són epítops estructurals.Els anticossos policlonals obtinguts immunitzant animals amb antígens desnaturalitzats són barreges d'anticossos específiques d'epítops individuals i es poden utilitzar en general per detectar estructures naturals o proteïnes diana desnaturalitzades.Un avantatge secundari de l'ús de proteïnes desnaturalitzades com a immunògens és que les proteïnes desnaturalitzades tendeixen a ser més immunogèniques i poden estimular una forta resposta immune en animals.
El sistema d'expressió d'Escherichia coli s'acostuma a triar amb finalitats antigèniques perquè és el sistema més costós en temps i diners.Per tal de millorar la possibilitat d'expressió de la proteïna diana i la comoditat de la purificació, de vegades només s'expressa un petit fragment de la proteïna diana, com ara un domini específic.
L'estructura tridimensional de les proteïnes
El domini específic d'una proteïna
Si el propòsit de la preparació d'anticossos és únicament per a la detecció de wb, és econòmic i ràpid utilitzar un pèptid sintètic petit com a antigen, però hi ha un risc d'immunogenicitat o no regenicitat feble a causa d'una selecció inadequada del segment peptídic.Com que la preparació d'anticossos requereix un llarg període, sovint es seleccionen dos o tres segments de pèptids diferents per preparar anticossos utilitzant antigen polipeptídic per assegurar la taxa d'èxit de l'experiment.
La puresa de l'antigen polipeptídic per a la immunització ha de ser superior al 80%.Tot i que una puresa més alta pot obtenir teòricament anticossos amb millor especificitat, a la pràctica, els animals sempre produeixen un gran nombre d'anticossos inespecífics, emmascarant així els beneficis de la puresa de l'antigen.
A més, la preparació d'anticossos a partir de pèptids petits s'ha de reticular amb l'antigen portador adequat per millorar la seva immunogenicitat.Dos portadors antigènics comuns són KLH i BSA.
Hora de publicació: 23-mar-2023