Els més propensos a fallades i solucions HPLC

Com a instrument d'alta precisió, l'HPLC pot provocar fàcilment alguns problemes petits si no s'utilitza de la manera correcta durant l'ús.Un dels problemes més comuns és el problema de la compressió de la columna.Com solucionar ràpidament els problemes d'un cromatògraf defectuós.El sistema HPLC consisteix principalment en una ampolla de dipòsit, una bomba, un injector, una columna, una cambra de temperatura de la columna, un detector i un sistema de processament de dades.Per a tot el sistema, els pilars, les bombes i els detectors són els components clau i les principals ubicacions susceptibles de problemes.

La clau de la pressió de la columna és l'àrea que necessita molta atenció quan s'utilitza HPLC.L'estabilitat de la pressió de la columna està estretament relacionada amb la forma del pic cromatogràfic, l'eficiència de la columna, l'eficiència de la separació i el temps de retenció.L'estabilitat de la pressió de la columna no vol dir que el valor de pressió sigui estable a un valor estable, sinó que el rang de fluctuació de pressió està entre 345 kPa o 50 PSI (permet l'ús de l'elució del gradient quan la pressió de la columna és estable i canvia lentament).La pressió massa alta o massa baixa és un problema de pressió de columna.

Els més propensos a fallades i solucions HPLC

1, l'alta pressió és el problema més comú en l'ús de HPLC.Això significa un augment sobtat de la pressió.En general, hi ha els motius següents: (1) En general, això es deu al bloqueig del canal de flux.En aquest punt, l'hauríem d'examinar a trossos.a.Primer, talleu l'entrada de la bomba de buit.En aquest punt, el tub PEEK es va omplir de líquid de manera que el tub PEEK era més petit que l'ampolla de dissolvent per veure si el líquid degotava a voluntat.Si el líquid no degota o goteja lentament, el capçal del filtre de dissolvent està bloquejat.Tractament: Remull en àcid nítric al 30% durant mitja hora i esbandida amb aigua ultrapura.Si el líquid goteja aleatòriament, el capçal del filtre de dissolvent és normal i s'està comprovant;b.Obriu la vàlvula de purga perquè la fase mòbil no passi per la columna i, si la pressió no es redueix significativament, el capçal blanc del filtre es bloqueja.Tractament: es van eliminar els punts blancs filtrats i es van sonicar amb isopropanol al 10% durant mitja hora.Suposant que la pressió baixa per sota dels 100 PSI, el capçal blanc filtrat és normal i s'està comprovant;c.Traieu l'extrem de sortida de la columna, si la pressió no disminueix, la columna queda bloquejada.Tractament: si es tracta d'un bloqueig de sal tampó, esbandiu el 95% fins que la pressió sigui normal.Si l'obstrucció és causada per algun material més altament conservat, s'hauria d'utilitzar un flux més fort que la fase mòbil actual per precipitar-se cap a la pressió normal.Si la pressió de neteja a llarg termini no disminueix segons el mètode anterior, es pot considerar que l'entrada i la sortida de la columna estan connectades a l'instrument, al contrari, i la columna es pot netejar amb la fase mòbil.En aquest moment, si la pressió de la columna encara no es redueix, només es pot substituir la placa del tamís d'entrada de la columna, però una vegada que el funcionament no és bo, és fàcil reduir l'efecte de la columna, així que intenteu utilitzar-ne menys.Per a problemes difícils, es pot considerar la substitució de columnes.

(2) Configuració incorrecta del cabal: es pot restablir el cabal correcte.

(3) Relació de flux incorrecta: l'índex de viscositat de diferents proporcions de fluxos és diferent i la pressió del sistema corresponent del flux amb una viscositat més alta també és més gran.Si és possible, els dissolvents de viscositat més baixa es poden substituir o tornar a configurar i preparar.

(4) Deriva zero de la pressió del sistema: ajusteu el zero del sensor de nivell de líquid.

2, la pressió és massa baixa (1) sol ser causada per fuites del sistema.Què cal fer: cerqueu cada connexió, especialment la interfície als dos extrems de la columna, i apreteu l'àrea de fuites.Traieu el pal i premeu o folreu la pel·lícula de PTFE amb la força adequada.

(2) El gas entra a la bomba, però la pressió sol ser inestable en aquest moment, alta i baixa.Més greument, la bomba no podrà absorbir el fluid.Mètode de tractament: obriu la vàlvula de neteja i neteja a un cabal de 3 ~ 5 ml/min.Si no, les bombolles d'aire es van aspirar a la vàlvula d'escapament mitjançant un tub d'agulla dedicat.

(3) Sense sortida de fase mòbil: comproveu si hi ha una fase mòbil a l'ampolla del dipòsit, si la pica està immersa a la fase mòbil i si la bomba està funcionant.

(4) La vàlvula de referència no està tancada: la vàlvula de referència es tanca després de la desacceleració.Normalment baixa a 0,1.~ 0,2 ml/min després de tancar la vàlvula de referència.

Resum:

En aquest article, només s'analitzen els problemes habituals de la cromatografia líquida.Per descomptat, en la nostra aplicació pràctica, ens trobarem amb més problemes.En el tractament de fallades, hauríem de seguir els principis següents: només canviar un factor a la vegada per determinar la relació entre el factor hipotètic i el problema;En general, quan substituïm peces per a la resolució de problemes, hauríem de prestar atenció a tornar a col·locar les peces intactes desmuntades per evitar malbarataments;Formar un bon hàbit de registre és la clau per a l'èxit de la gestió de fallades.En conclusió, quan s'utilitza HPLC, és important parar atenció al pretractament de la mostra i al bon funcionament i manteniment de l'equip.