A Limulus reagens tripeptid/endotoxin szubsztrát működési elve és előállítása

A Limulus reagens tripeptid egy olyan tripeptid anyag, amelynek specifikus szekvenciája patkórák vérsejt-lizátumából van kivonva vagy mesterségesen szintetizálva. A Limulus reagens tripeptid egy kromogén szubsztrát, amelyet kvantitatív elemzéshez (például bakteriális endotoxin teszthez) használnak a Gram-negatív baktériumok komponenseinek kimutatására és mérésére.—endotoxinok. Az endotoxinok által aktivált enzimek hatására egy színes vegyület (például p-nitroanilin) ​​szabadul fel, ami lehetővé teszi a színintenzitás mérését és az endotoxin-tartalommal való korrelációját.

Működési elv

Endotoxin aktiválás: Endotoxinok jelenlétében a patkórák vérében lévő amebociták enzimeket szabadítanak fel, ezáltal beindítják a véralvadási kaszkádot.

Enzimhatás: Az aktivált enzim (általában véralvadási enzim) ezután egy kromogén szubsztrátra hat.

Kromogén reakció: Az enzim lehasítja a szubsztrátot, és egy sárga vegyületet, a p-nitroanilint (pNA) szabadít fel.

Kvantitatív analízis: A sárga szín intenzitása arányos a mintában lévő endotoxin-tartalommal, és általában spektrofotométerrel mérik 405 nm abszorbancián.

Elkészítési módszerek

A Limulus reagens tripeptidet kétféle módon lehet előállítani.

1. Természetes összetevők kinyerése Limulus vérsejtekből és az aktív tripeptid kinyerése elválasztással és tisztítással.

2. Szilárd fázisú szintézis technológia alkalmazása meghatározott aminosavszekvenciák egymás utáni összekapcsolására, pontosan szabályozva a tripeptid szerkezetét.

A Limulus védelmi politikája miatt (például Zhejiang, Fujian, Guangdong és Guangxi tartományok „a tartomány kulcsfontosságú védett vízi vadvilágaként” tartják nyilván / Hongkong 2012 végén rendeletet adott ki a fenékvonóhálós halászat tilalmáról), és mivel a kitermelési folyamat viszonylag összetett és kihívást jelent, az első módszer költsége magas. Ezért a szilárd fázisú szintézist manapság általánosan alkalmazzák. Specifikus aminosavszekvenciák egymás utáni összekapcsolásával a tripeptid szerkezete pontosan szabályozható. Ez a módszer nemcsak a termék stabilitását és konzisztenciáját biztosítja, hanem nagyüzemi gyártást is lehetővé tesz, kielégítve a gyógyszeripar reagensvizsgálati igényeit.