Háttér
A Melanotan I, más néven Afamelanotid, egy 13 aminosavból álló lineáris polipeptid, amely egyre jelentősebb szerepet játszik a gyógyszerkutatásban. A Melanotan I elsődleges angol neve a Melanotan-1 és az Afamelanotide. Az α-melanocita-stimuláló hormon, az α-MSH szintetikus analógjaként a Melanotan I az eritropoetikus protoporfíria okozta fényérzékenységi rendellenességek kezelésére használható. Jelenleg a legtöbb Melanotan I termék csak kutatási célra van felcímkézve, és még nem emberi felhasználásra szánták. A hagyományos szilárd fázisú szintézisben a gyanta megválasztása jelentősen befolyásolja a kapcsolási hatékonyságot és a termék végső tisztaságát.
Alapinformáció
Kínai név: Melanotan 1
Angol név: Melanotan-1
Cégszám: GT-A006
CAS-szám: 75921-69-6
Sorrend: SYS{Ne}EH{D-Phe}RWGKPV-NH2
Molekulaképlet: C78H111N21O19
Molekulatömeg: 1646,88
Elkészítés módja
ÉN. Fmoc-Val-Amino gyanta előállítása
1. lépés:Mérjünk be 11,11 g (5 mmól) Ramage Amide AM gyantát 0,45 mmól/g szubsztitúciós fokozattal, és adjuk hozzá egy szilárd fázisú reaktorhoz. Adjon hozzá DCM-et, hogy a gyanta 30 percig duzzadjon, majd engedje le. Mossa háromszor DMF-fel. Adjunk hozzá 20 % (v/v) piperidint tartalmazó DMF-oldatot, és reagáltatjuk 5 percig. Adjunk hozzá további 20%-os piperidin-DMF-oldatot, és reagáltatjuk 10 percig, közben egy DMF-mosással. A reakció befejeződése után leszűrjük, és háromszor mossuk DMF-fel.
2. lépés:Oldjunk fel 5,09 g Fmoc-Val-OH-t, 2,02 g HOBT-t (1-hidroxi-benzotriazol) és 2,32 ml DIC-t (N,N'-diizopropil-karbodiimidet) DMF-ben 0 °C-on. A teljes oldódás után az elegyet a reakcióoszlophoz adjuk, és szobahőmérsékleten 1 órán át reagáltatjuk. Kövesse nyomon a reakció előrehaladását a ninhidrin teszt segítségével, biztosítva a negatív eredményt. A reakció befejeződése után háromszor mossuk DMF-fel, hogy Fmoc-Val-amino-gyantát kapjunk.
II. A Melanotan I teljesen védett gyantapeptidjének előállítása.
1. lépés:Adjunk hozzá 20%-os piperidint DMF oldatban (térfogat arány) a fenti Fmoc-Val-aminogyantához. Reagáljon 5 percig, majd adjon hozzá egy újabb adag 20%-os piperidint DMF-oldatban, és reagáljon 10 percig. A szünet alatt egyszer mossa le DMF-fel. A reakció befejeződése után vákuumban szárítjuk, és háromszor mossuk DMF-fel.
2. lépés:Oldjunk fel 5,06 g Fmoc-Pro-OH-t, 2,02 g HOBT-t (1-hidroxi-benzotriazol) és 2,32 ml DIC-t (N,N'-diizopropil-karbodiimidet) DMF-ben 0 °C-on. A teljes oldódás után az elegyet a reakcióoszlophoz adjuk, és szobahőmérsékleten 1 órán át reagáltatjuk. Kövesse nyomon a reakció előrehaladását a ninhidrin teszt (Kaiser teszt) segítségével, amíg negatív eredményt nem kap. A befejezés után háromszor mossuk DMF-fel, hogy Fmoc-Pro-Val-aminogyantát kapjunk.
3. lépés:A 2. lépésben leírt módszert követve szekvenciálisan kapcsolja össze az egyes aminosavakat a Melanotan I szekvenciája szerint. Az Ac-Ser(tBu)-OH kapcsolási reakció befejeződése után mossa le háromszor DMF-fel, háromszor DCM-mel (diklór-metán) és háromszor metanollal. Vákuumban szárítva 23,89 g teljesen védett Melanotan I gyantához kötött peptidet kapunk.
III. Melanotan I nyers peptid előállítása
23,89 g teljesen védett Melanotan I gyantához kötött peptidet helyeztünk egy gömblombikba. 0 °C-on keverés közben lassan hozzáadunk 250 ml előre elkészített hasítási koktélt (TFA:tioanizol:fenol:triizopropil-szilán:víz = 82,5:7,5:5:3:2 térfogatarány). Az elegyet alacsony hőmérsékleten 0,5 órán át, majd szobahőmérsékleten 2 órán át reagáltatjuk. A hasítási oldatot ezután vákuumban szűrjük. Ezt az oldatot lassan hozzáadjuk 2 liter jéghideg vízmentes dietil-éterhez keverés közben. A nyers peptidet szűréssel izoláljuk, háromszor mossuk jéghideg dietil-éterrel, így 8,55 g nyers Melanotan I peptidet kapunk.
IV. Melanotan I tisztított peptid előállítása
1. lépés:Oldjuk fel a nyers Melanotan I peptidet 100 ml tisztított vízben, és szűrjük át 0,45 μm-es membránon, hogy nyers peptid oldatot kapjunk.
2. lépés:Tisztítsa meg a nyers Melanotan I peptidet nagy teljesítményű folyadékkromatográfiával (HPLC). Használjon DAC-HB50 dinamikus axiális kompressziós oszlopot A mozgófázissal (0,05%-os trifluor-ecetsav vizes oldata) és B mozgófázissal (0,05%-os trifluor-ecetsav acetonitrilben). Végezzen gradiens elúciót az elválasztáshoz és a tisztításhoz. Határozza meg a mintát UV-detektor segítségével, és gyűjtse össze frakciókban a célcsúcsnak megfelelő peptidoldatot.
3. lépés:HPLC-s tisztítás után 180 ml Melanotan I trifluor-acetát-oldatot kapunk, amelynek tisztasága meghaladja a 99%-ot. Az oldatot rotációs bepárlóval 50 ml-re koncentráljuk.
4. lépés:Kiegyensúlyozzuk a kromatográfiás oszlopot ionmentesített vízzel, és töltsünk be 50 ml tisztított Melanotan I trifluor-acetát oldatot (tisztaság >99%). 50 percig eluáljuk 2%-os vizes ecetsavoldat-rendszerben. Az összegyűjtött célterméket rotációs bepárlóval 80 ml-re koncentráljuk. Végezzen előfagyasztva szárítást és fagyasztva szárítást, hogy végül 5,33 g Melanotan I tisztított peptidet kapjon, 32,33%-os hozammal.
Feladás időpontja: 2026-01-05