Néhány kérdés és válasz a módosított peptidek oldhatóságával kapcsolatban

1. Milyen szennyeződések vannak a nem HPLC tisztítottakban?

A: Módosított peptid és nem módosított peptid szennyeződések nyers és sótartalmú módosított peptidben: például nem teljes hosszúságú módosított peptid és néhány nyersanyag, például DTT, TFA stb.

2. Milyen szennyeződéseket tisztítanak a HPLC?

V: A HPLC által megtisztított módosított peptid továbbra is sok szennyeződéssel rendelkezik, és a szennyeződések általában rövid peptidek és egy kis TFA.

3. Meddig is alkalmas?

V: A módosított peptid szintézisének figyelembe kell vennie a módosított peptid, a töltés, a hidrofilitás és a hidrofób tulajdonság hosszát, valamint más tényezőket. Minél hosszabb a teljes hossza, annál alacsonyabb a nyers termék tisztasága és hozama, annál nagyobb a tisztítás nehézsége és a szintézis nehézségének valószínűsége. A módosított peptid funkcionális doménjének szekvenciájának megváltoztatására azonban nem lehet megváltoztatni, de a módosított peptid szintézisének befejezése érdekében néha csak néhány kiegészítő aminosavat lehet hozzáadni a funkcionális domén felfelé és lefelé, hogy javítsák a módosított peptid oldhatóságát és hidrofóbitását. Ha a módosított peptid túl rövid, akkor problémák merülhetnek fel a szintézisben. Az első probléma az, hogy a szintetizált módosított peptidnek bizonyos nehézségei vannak az utófeldolgozási folyamatban. Az 5 peptidben a módosított peptid általában hidrofób aminosavakkal rendelkezik, különben az utófeldolgozás nehéz. A 15 aminosavmaradék alatti módosított peptideket általában kielégítő hozammal és hozammal lehet elérni.

Néhány kérdés és válasz a módosított peptidek oldhatóságával kapcsolatban

4. Hogyan lehet megítélni a módosított peptid oldhatóságát a szekvenciából?

(1) A hidrofób aminosavak, például Leu, Val, IIE, MET, PHE és TRP nagy részét tartalmazó módosított peptid nem könnyen oldódik vizes oldatban, vagy szinte oldhatatlan. Ez az aminosav problematikus lehet a tisztításban vagy a szintézisben.

(2) the proportion of hydrophobic amino acids under normal conditions < The proportion of charged amino acids can reach up to 20%. If the N or C of the modified peptide is short, the increase of polar amino acids can also improve the solubility.

5. Miért nehéz szintetizálni a CYS, a MET vagy a TRP szintetizálását?

A: A CYS, MET vagy TRP -t tartalmazó módosított peptideket nem lehet szintetizálni, és a magas tisztaságú termékeket nehéz megszerezni. Ez elsősorban annak a ténynek köszönhető, hogy ezek a csoportok kevésbé stabilak és hajlamosak az oxidációra. Ezen módosított peptidek használata és tárolása speciális ellátást igényel a fedél ismételt kinyitásának megakadályozására.

6, Miért lesz nagyon alacsony szintetikus hozam vagy tisztaság?

V: Jelentős különbség van a módosított peptidek szintézisének és a primerek szintézisének között. Nagyon kevés olyan primer van, amelyet nem lehet szintetizálni, de vannak gyakran módosított peptidek, amelyeket nem lehet szintetizálni. Mint például a Val, Ile, Tyr és Trp, Leu, Phe, GLN és THR aminosav közelében vagy a hurokhoz, a módosított peptidek nem tudnak oldódni a szintetikus folyamatban, a szintetikus hatékonyság alacsonyabb. A szintézis hatékonysága és a termék tisztasága nagyon alacsony a következő esetekben, például: ismétlődő pro, ser-ser, ismétlődő Asp, négy egymást követő gly stb.

7. Hogyan tisztítják meg?

V: A módosított peptideket általában fordított fázisú oszlop (például C8, C18 stb.) Tisztítja meg 214 nm-en. A pufferrendszer általában TFA -t, PH2.0 -t tartalmazó megoldás. A Buffera 0,1%TfaNDDH2O -t, a BufferB pedig 1%TFA/ACN/PH2.0 -t tartalmazott. A tisztítás előtt feloldottuk a Buffera -ban; Ha az oldat nem kielégítő, oldja fel a pufferbel, majd hígítsa a Buffera -val; Az erősen hidrofób módosított peptidekhez néha egy kis formikacid vagy ecetsavat adunk hozzá.