A fehérje tisztítása egy specifikus cél fehérjefrakcióinak elválasztásának folyamata a szövetekből, sejtektől vagy fehérjevelektől. A fehérje tisztításának nemcsak az izolált fehérje erős tisztaságát kell előmozdítania, hanem meg kell őriznie a fehérje biológiai aktivitását is. Ezért egy vagy több kombinált tisztítási sémát kell kidolgozni a különböző fehérje tulajdonságok szerint. A fehérje tisztításának fő stratégiája a különféle fehérjék hasonlóságának és különbségeinek kiaknázása. A fehérjék közötti hasonlóság alapján a nem protein anyag eltávolítható, majd a célfehérje elválasztható a protein különbségek alapján. Különösen a géntechnikai technológia gyors fejlődésével, bár sok fehérjét genetikai rekombinációval expresszálnak, a fehérje tisztításának szintje közvetlenül kapcsolódik a fehérje tisztaságához és aktivitásához. Ezért a fehérje tisztítása továbbra is fontos téma a modern biotechnológiában.
Célkitűzés
Egyrészt a fehérjék izolálása és tisztítása különösen fontosak a fehérjék szerkezetének és működésének mélyreható vizsgálatához, másrészt a fehérjék elválasztása és tisztítása közvetlenül kapcsolódnak a fehérjék alkalmazásának. Ezért a fehérjetisztítás fontos szerepet játszik a biológiai tudomány kutatásában és alkalmazásában, és a fehérje -elválasztási és tisztítási technológia szintén kulcsfontosságú technológia a biológiai iparban.
Az út
A fehérje tisztításának elve az, hogy a célfehérjét ésszerű hatékonysággal, sebességgel, hozammal és tisztasággal elválasztjuk, miközben megőrzi biológiai aktivitását és kémiai integritását. A fő lépések közé tartozik a kísérleti anyagok kiválasztása, az előkezelés, a fehérje extrahálás, a nyersfehérje osztályozása, a finom fehérje osztályozás és a fehérje azonosítása.
A tisztítási folyamatnak figyelmet kell fordítania: 1 a fehérje aktivitásra gyakorolt hatásának minimalizálása érdekében, például a túl magas vagy túl alacsony pH, a magas hőmérséklet és a nehézfémek hatásainak megakadályozása érdekében; 2. működjön alacsony hőmérsékleten; 3. Próbálja meg a mintában tartani a fehérjetartalom vezető szintjét.
Osztályozás
A fehérjetisztítás a tisztítási módszer típusának megfelelően osztályozható:
I. csapadék módszer, beleértve a só lerakódását, sóionok felhasználásával a szilárdozott réteg elpusztítására a fehérje felületén, kitéve a hidrofób területet, majd lerakódni az előzetes tisztítás céljának elérése érdekében; A szerves lerakódás, szerves oldószerek felhasználásával a víz aktivitásának csökkentésére, megsemmisíti a fehérje felületén lévő koagulált filmet, ami fehérje csapadékhoz vezet. A csapadék enyhe tisztítási módszer, de a tisztaság nem magas, és felhasználható elsődleges tisztítási folyamatként.
Második, dialízis módszer, beleértve a dialízis táskát és az ultraszűrési módszert. Dialízissel és ultraszűréssel a kis molekuláris szennyeződések kiküszöbölhetők, és a fehérje oldat is cserélhető.
3. A kromatográfiás módszerek közé tartozik a molekuláris sziták gélkromatográfiája, az ioncserélő kromatográfia, az affinitáskromatográfia (fém kelátképző affinitás -kromatográfia, A/G kromatográfia, receptor protein, szubsztrát stb.), Hidrofób kromatográfia, fordított kromatográfia és nagy teljesítményű folyadékkromatográfia. A jobb eredmények elérése érdekében gyakran két kromatográfiás módszer, például affinitáskromatográfiára és ioncserélő kromatográfiára van szükség.
A fenti módszerek mellett számos más tisztítási módszer is létezik, például a sűrűséggradiens centrifugálás, amelyek alkalmasak a nagy tisztaságú fehérjék előállítására, de magasabb kísérleti körülményeket igényelnek. A fehérjekristályok alkalmasak biológiai szerkezet elemzésére, például az X-átvitelre.
A postai idő: 2025-07-01